冻干精制人白细胞干扰素制造及检定规程
本品系用特定的诱生剂诱导健康人白细胞，经提取后制成的冻干干扰素注射剂。用于某些病毒性疾病和肿瘤的辅助治疗，对免疫缺陷性疾病也有一定疗效。
1 制造
1.1制造要求
1.1.1白细胞
献血员供血应符合献血员体检及化验标准。一次供血不超过400ml，供全血间隔在3个月以上。
白细胞的分离，应在采血后48小时内进行。活细胞数应达到90%以上。
1.1.2诱生病毒
采用新城疫病毒(NDV)F株或仙台病毒，经检定血凝效价达到适宜滴度，方可投产。
1.1.3培养液
采用RPMI-1640，内含适量人血清和庆大霉素或卡那霉素。不得使用β椖邗0防嗫股亍R部捎闷渌室伺嘌骸?/P>
1.1.4制造工作室的设置，应符合工艺流程要求。冷库及各种生产用具，必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。制造工作室建筑应便于清洁、消毒、防霉。在制造过程中，应采取各种有效措施，防止细菌及热原质污染。直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前应除热原质及灭菌处理。
1.1.5生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于分析纯。
1.2制造工艺
1.2.1诱生病毒
采用9～10日龄健康鸡胚，于尿囊腔接种适量病毒，37℃培养48～72小时，鸡胚发育良好，病毒达到适宜滴度后，收集尿囊液，并做无菌试验，合格后合并，抽样做滴度测定，放?/FONT>20℃待用。亦可用其他适宜方法制备诱生病毒。
1.2.2 白细胞悬液
用离心法分离血浆，吸取白细胞层，用氯化铵液裂解红细胞，或用其他适宜方法分离白细胞。然后用培养液稀释，以每ml含活细胞1.0×107为宜。
1.2.3 起动与诱生
白细胞悬液中加入少许白细胞干扰素，于37℃水浴搅拌培育2小时，加入适量诱生病毒，待干扰素效价达到最高峰时，收集上清，即为粗制干扰素，置?/FONT>20℃保存。
1.2.4 纯化
在粗制干扰素(效价应在1.0×104IU以上)中加入硫氰酸钾盐析，然后分别在酸性和碱性条件下用乙醇分级沉淀，去除杂蛋白，再用硫氰酸钾提纯一次。亦可采用经卫生部批准的其他适宜方法。
1.2.5 溶解、透析或超滤
检查硫氰酸钾为阴性，除菌过滤后进行半成品检定。合格后方可分装、冻干。
1.2.6 半成品检定
半成品应做理化检查和比活性测定，比活性应≥1.0×106IU/mg蛋白。加入人血白蛋白作保护剂后，应做无菌试验、安全试验和热原质试验。试验方法及判定标准同成品检定。
1.2.7 冻干
按《人血白蛋白(低温乙醇法)制造及检定规程》1.2.5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。
2 成品检定
2.1 外观
本品应为白色或淡黄色疏松体，加水溶解后，为无色或淡黄色澄清液体，不得有摇不散的颗粒。
2.2 化学检定
按《生物制品化学检定规程》进行。
2.2.1 水分测定
水分含量应≤3%(g/g)。
2.2.2 pH值
pH值应为6.8～7.8。
2.2.3 硫氰酸钾残余量测定。
取2滴干扰素原液加2滴9%三氯化铁溶液，不呈现微红色为合格。
2.3 无菌试验
按《生物制品无菌试验规程》进行。每批抽样品不少于10支。
2.4 热原质试验
按《生物制品热 原质试验规程》进行。每只家兔静脉注射0.2ml(2×105IU)。判定标准按该规程4.1项要求进行。
2.5 全试验
2.5.1 豚鼠试验
用体重300～400g豚鼠2只，每只腹侧皮下注射干扰素1ml(1.0×106IU)，观察7天，动特健存，每只体重增加者为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复试一次，判定标准同前。
2.5.2 小白鼠试验
用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射干扰素0.5ml(5×105IU)，半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。
2.6 HBsAg检测
每安瓿冻干制品(1ml装)加0.1ml灭菌注射用水溶解，用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒测定，应为阴性。
2.7 效价测定
按附录方法测定，应为标示量的80%～150%。
2.8 残余牛血清蛋白含量测定
如采用组织培养法制备诱生病毒，则成品中残余牛血清蛋白含量应≤50ng/支。
3 规格
1.0×106IU/支
4 保存与效期
应保存于10℃以下。有效期自品效价检定合格之日起为1.5年。
1 制造
1.1制造要求
1.1.1白细胞
献血员供血应符合献血员体检及化验标准。一次供血不超过400ml，供全血间隔在3个月以上。
白细胞的分离，应在采血后48小时内进行。活细胞数应达到90%以上。
1.1.2诱生病毒
采用新城疫病毒(NDV)F株或仙台病毒，经检定血凝效价达到适宜滴度，方可投产。
1.1.3培养液
采用RPMI-1640，内含适量人血清和庆大霉素或卡那霉素。不得使用β椖邗0防嗫股亍R部捎闷渌室伺嘌骸?/P>
1.1.4制造工作室的设置，应符合工艺流程要求。冷库及各种生产用具，必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。制造工作室建筑应便于清洁、消毒、防霉。在制造过程中，应采取各种有效措施，防止细菌及热原质污染。直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前应除热原质及灭菌处理。
1.1.5生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于分析纯。
1.2制造工艺
1.2.1诱生病毒
采用9～10日龄健康鸡胚，于尿囊腔接种适量病毒，37℃培养48～72小时，鸡胚发育良好，病毒达到适宜滴度后，收集尿囊液，并做无菌试验，合格后合并，抽样做滴度测定，放?/FONT>20℃待用。亦可用其他适宜方法制备诱生病毒。
1.2.2 白细胞悬液
用离心法分离血浆，吸取白细胞层，用氯化铵液裂解红细胞，或用其他适宜方法分离白细胞。然后用培养液稀释，以每ml含活细胞1.0×107为宜。
1.2.3 起动与诱生
白细胞悬液中加入少许白细胞干扰素，于37℃水浴搅拌培育2小时，加入适量诱生病毒，待干扰素效价达到最高峰时，收集上清，即为粗制干扰素，置?/FONT>20℃保存。
1.2.4 纯化
在粗制干扰素(效价应在1.0×104IU以上)中加入硫氰酸钾盐析，然后分别在酸性和碱性条件下用乙醇分级沉淀，去除杂蛋白，再用硫氰酸钾提纯一次。亦可采用经卫生部批准的其他适宜方法。
1.2.5 溶解、透析或超滤
检查硫氰酸钾为阴性，除菌过滤后进行半成品检定。合格后方可分装、冻干。
1.2.6 半成品检定
半成品应做理化检查和比活性测定，比活性应≥1.0×106IU/mg蛋白。加入人血白蛋白作保护剂后，应做无菌试验、安全试验和热原质试验。试验方法及判定标准同成品检定。
1.2.7 冻干
按《人血白蛋白(低温乙醇法)制造及检定规程》1.2.5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。
2 成品检定
2.1 外观
本品应为白色或淡黄色疏松体，加水溶解后，为无色或淡黄色澄清液体，不得有摇不散的颗粒。
2.2 化学检定
按《生物制品化学检定规程》进行。
2.2.1 水分测定
水分含量应≤3%(g/g)。
2.2.2 pH值
pH值应为6.8～7.8。
2.2.3 硫氰酸钾残余量测定。
取2滴干扰素原液加2滴9%三氯化铁溶液，不呈现微红色为合格。
2.3 无菌试验
按《生物制品无菌试验规程》进行。每批抽样品不少于10支。
2.4 热原质试验
按《生物制品热 原质试验规程》进行。每只家兔静脉注射0.2ml(2×105IU)。判定标准按该规程4.1项要求进行。
2.5 全试验
2.5.1 豚鼠试验
用体重300～400g豚鼠2只，每只腹侧皮下注射干扰素1ml(1.0×106IU)，观察7天，动特健存，每只体重增加者为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复试一次，判定标准同前。
2.5.2 小白鼠试验
用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射干扰素0.5ml(5×105IU)，半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。
2.6 HBsAg检测
每安瓿冻干制品(1ml装)加0.1ml灭菌注射用水溶解，用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒测定，应为阴性。
2.7 效价测定
按附录方法测定，应为标示量的80%～150%。
2.8 残余牛血清蛋白含量测定
如采用组织培养法制备诱生病毒，则成品中残余牛血清蛋白含量应≤50ng/支。
3 规格
1.0×106IU/支
4 保存与效期
应保存于10℃以下。有效期自品效价检定合格之日起为1.5年。