《动脉粥样硬化》第二节　甘油三酯测定

第二节　甘油三酯测定

     甘油三酯又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，相应称为甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG)。血清中90%～95%是TG，TG中结合的脂肪酸分别为油酸(44%)、软脂酸(26%)、亚油酸(16%)和棕榈油酸(7%)。

    血清TG测定方法一般分为物理化学法、化学法及酶法三大类。

    血清中TG的化学组成并不单一，准确求其分子较为困难。因标准不同，测定结果存在差异。化学法多采用三棕榈精(软脂精)(分子量807.3)、三油精(分子量895.4)为标准，按摩尔浓度计算。酶法测定以三油精为标准物进行换算。

    1.化学法

    化学测定法包括：①TG的抽提分离；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲掌显色定量等四个阶段。操作较为繁杂，影响测定因素太多，本法准确性差，一般很少用。

    2.酶法测定

    酶法测定包括：①TG的抽提与皂化；②加水分解生成甘油糖定量等二个阶段。目前常规检测应用的方法有甘油激酶(glycerolkinase,GK)法和甘油氧化酶(glycerol Oxidase,GOD)法。操作简便，快速准确，并能在自动化生化分析仪上进行批量测定。

    一、乙酰丙酮法

    1.原理

    血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯，经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3，5二乙酰，1，4二氢甲基吡啶，其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比，420nm测定定量。该法可用于基本功训练及组织细胞TG的提取测定。

    2.试剂组成

    代号

    种类

    浓度

    组成

    贮2-8℃

    有效时间

    R1

    抽提液

    (CH₃)CHOH(A.R)重蒸馏

    R2

    吸附剂

    氧化铝，水洗除去微细颗粒，110℃烤干3h以上

    闭封

    一周

    R3

    皂化剂

    5%

    KOH 5g+H₂O→100ml

    R4

    醋酸溶液

    2mol/L

    CH₃COOH 11.5ml+H₂O→100ml

    R5

    过碘酸钠

    0.05mol/L

    NaIO₄1.07g+H₂O→100ml

    R6

    氧化剂

    R4 1体积+R51体积

    一周

    R7

    醋酸铵液

    CH₃COONH₂ 15.4g+H₂O→100ml

    R8

    显色剂

    CH₃COCH₂COCH₃0.75ml+R-1

    40ml+R-7 100ml+R-4 80ml

    R9

    参考液

    2mg/dl

    三油酸甘油酯

    2mg+R-1→100ml(TG100mg/dl)

    3.操作

    按图15-3操作。

    图15-3 血清甘油三酯(乙酯丙酮法)测定操作图

    4.计算

    血清TG浓度=E_SA/E_ST×1.13(mmol/L)

    二、酶法(GK-GPO-POD比色法)

    血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，尔后，在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H₂O₂，H₂O₂与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶(POD)作用下，生成红色亚醌化合物(quinoneimine)，比色(500nm)，其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。

    (一)手工测定法

    1.试剂组成

    代号

    种类

    浓度

    贮存2～8℃

    R1

    磷酸甘油氧化酶

    ≥3.0KU/L

    冷藏

    (A液)

    抗坏血酸氧化酶

    ≥1.0KU/L

    甘油激酶

    ≥0.7KU/L

    4-氨基安替比林

    80mg/L

    R2

    脂蛋白脂酶

    ≥2.0KU/L

    冷藏

    过氧化物酶

    ≥10KU/L

    ESPAS

    300mg/L

    R3(参考液)

    甘油酸三脂

    200mg/dl(2.26mmol/L)

    冷藏

    *：一般采用商品试剂盒

    图15-4 血清甘油三酯测定法(酶法)操作图

    2.操作

    按图15-4操作。

    3.计算

    血清TG浓度=E_SA/E_ST×2.26(mmol/L)

    (二)生化分析仪检测

    全自动生化分析仪测定操作(以CL-7200型为例)。

    1.试剂

    A液：GK，GPO，4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。

    B液：POD，Lipase,ESPAS等。

    标准液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。

    2.上机参数

    名称

    参数

    方法

    终点法

    波长

    双波长(540nm 700nm)

    试剂A反应时间

    2～3min

    试剂B反应时间

    5～6min

    反应温度

    37℃

    样本用量

    4μl

    试剂A用量

    200μl

    试剂B用量

    100μl

    单位

    mmol/L

    3.操作过程

    4.计算

    以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算，自动打印结果。

    5.注意事项

    ①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。

    ②试剂在有效期内2～8℃避光保存。

    ③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。

百拇医药网 http://book.100md.com/tcm/dongmaizhouyangyinghua/17_02.htm

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