第一节 血清载脂蛋白定量的方法学及其参考值的评价
1.单向免疫扩散法(radialimmunodiffusion,RID)
该法较简单，一般实验室均可进行。消耗较多的抗血清，扩散过程至少24h，最多需72h，测定下限值为10μg/ml。该方法虽然简单，应严格控制有关条件如：含抗血清的琼脂糖凝胶厚度要均匀；加入小孔的稀释抗原(血清)量要准确；含ApoB的脂蛋白如VLDL和LDL颗粒大小不一，如琼脂糖凝胶浓度在1.5%～2.0%,可能仅测出LDL的ApoB，大颗粒的LDL及VLDL的ApoB可能无法测出，因为难以穿过琼脂糖凝胶的孔隙。另外，扩散过程中，凝胶板一定要水平，否则易使扩散环呈椭圆形，难以准确测量直径。一般使沉淀环以3.5～10.0mm为宜，应在两个方向测量直径，其精度要求达到0.1mm。采用五种不同浓度参考值，测定沉淀环面积对相应浓度关系以曲线回归方程作图。
2.电免疫测定法(electroimmunoassay,EIA)
该法灵敏，抗血清用量少，如琼脂糖缓冲液中加入聚乙二醇及甘氨酸，其电泳时间可缩短一倍，火箭峰高以1～4cm为宜，火箭峰的测量可以计算面积或峰高，峰高从中心量起。测量精度最好能在0.1mm,灵敏度约2μg/ml，又称为火箭电泳法。
3.免疫比浊法(immunoturbidimetryassay,ITA)
简便快速，在自动分析仪进行操作并能批量检测，是目前临床使用最多的方法学。免疫比浊法有两种：一是测定光散射的，又名免疫散射比浊法(INA)；需用特殊的激光浊度仪；另一种是利用光度计测定通过混浊溶液后的透光强度，称为透射免疫比浊法(ITA)，其灵敏度低于INA。比浊法可以终点法和速率法测定，速率法是根据散射光强度与时间的关系，以微机处理计算出抗原抗体复合物形成的最大反应速度，后者与溶液中抗原量成正比，常可在1min内完成测定过程，可自动扣除空白；终点法比速率法稳定，一般多用终点法。
4.酶联免疫法(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)
该技术已广泛应用于极微量蛋白的定量测定，可测出ng级水平的抗原或抗体含量，该法可用于ApoE、C-Ⅱ、C-Ⅲ等含量较少的载脂蛋白的定量测定。
5.放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)
该法灵敏，抗血清用量少，所需设备较多，一般用125I标记抗原作为示踪物，除ApoC-Ⅰ(不含酪氨酸)以外，都可以作碘标记(氯胺T法)，以双抗体法测定RIA法可检测最低至3～5ng。临床检验中不常用此法，主要用于动物实验的科学研究工作。
还有荧光免疫法和化学发光法等灵敏度很高的方法。
血清载脂蛋白测定的方法，从测定原理、方法学评价及参考值，刘秉文和李健斋等人作了大量的工作，为国内的载脂蛋白测定的临床应用奠定了基础。周新曾于1986年首先在国内研制成功抗人ApoB100血清，其后，国内同仁陆续研制出ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、E、CⅡ、CⅢ抗血清，并广泛应用于临床的疾病诊断，在部分大医院已成为常规检查项目。
刘秉文在“脂蛋白与动脉粥样硬化“一书中全面总结了国内外载脂蛋白测定的方法学及其参考值，本节将引用如下比较表：
表18-1 ApoAⅠ免疫测定法的比较
RIA
ELISA
EIA
RID
INA
ITA
抗体
P，M
P，M
P
P，M
P
P
灵敏度(n)
0.3～10
0.1～0.5
100
100
150
100
测定范围(ng)
1～200
0.5～15
100～500
200～800
200～500
200～600
批内CV(%)
3～9
4～8
3～5
6
3～7
1
批间CV(%)
5～10
8～10
3～9
10
6～7
6
正常值(g/L)
1.0±0.2
1.5±0.2
1.2±0.2
1.2±0.1
1.2±0.2
1.7±0.2
P:多克隆抗体；M：单克隆抗体；RIA：放射免疫法；ELISA；酶联免疫法；RID：单向免疫扩散法；INA：免疫散射比浊法；ITA：免疫透射比浊法。
(源自：刘秉文，1995.)
表18-2 ApoAⅡ免疫测定法的比较
RIA
ELISA
EIA
RID
INA
ITA
抗体
P
P，M
P
P
P
P
灵敏度(g)
0.5
20
5
30
20
测定范围(ng)
1～20
5～50
30～60
50～400
50～900
40～150
批内CV(%)
7
8
5
5
5
5
批间CV(%)
9
7
8
-
7
6
正常值(g/L)
0.25±0.4
0.35±0.05
0.76±0.2
0.29±0.02
0.37±0.09
0.36±0.03
(源自：刘秉文，1995.)
表18-3 ApoAⅣ免疫测定法的比较
RIA
ELISA
EIA
抗体
P
P
P
灵敏度(g)
5
0.2
20
测定范围(ng)
5～50
0.5～8
50～200
批内CV(%)
5
3.60
5
批间CV(%)
7
8
9
正常值(g/L)
0.17±0.03
0.14±0.05
0.14±0.04
(源自：刘秉文，1995.)
表18-4 ApoB100免疫测定法的比较
RIA
ELISA
EIA
RID
INA
ITA
抗体
P，M
P，M
P
P，M
P
P
灵敏度(n)
5～10
2～20
50～300
300
300
300
测定范围(ng)
0～100
2～10
20～500
50～600
300～500
100～500
批内CV(%)
4～8
4～7
1～7
3～7
4～7
2
批间CV(%)
7～11
10
3～10
6～7
7～8
2
正常值(g/L)
0.9±0.2
0.85±0.1
0.6±0.3
0.8±0.2
0.8±0.2
0.8±0.3
(源自：刘秉文，1995.)
表18-5 ApoCⅠ免疫测定法的比较
RIA
ELISA
INA
抗体
P
P
P
灵敏度(n)
1
5
50
测定范围(ng)
5～30
15～100
-
批内CV(%)
7
3
5
批间CV(%)
9
5
8
正常值(g/L)
0.05±0.03
0.06±0.002
0.06±0.01
(源自：刘秉文，1995.)
表18-6 ApoCⅡ免疫测定法的比较
RIA
ELISA
EIA
RID
ITA
抗体
P
P
P
P
P
灵敏度(g)
10
0.3
45
40
10
测定范围(ng)
10～80
0.5～5
70～600
40～600
12～50
批内CV(%)
6
3
6.5
2.1
3.3
批间CV(%)
10
8
8.2
3.9
6.2
正常值(g/L)
0.04±0.01
0.033±0.008
0.04±0.002
0.039±0.017
0.04±0.01
(源自：刘秉文，1995.)
表18-7 ApoCⅢ免疫测定法的比较
RIA
ELISA
EIA
RID
INA
ITA
抗体
P
P
P
P
P
P
灵敏度(g)
1
0.3
10
76
20
15
测定范围(ng)
2～20
1～6
20～80
76～600
50～400
30～120
批内CV(%)
13
4.3
8
2.5
6.3
5.2
批间CV(%)
13
4.3
8
3.5
6.3
5.2
正常值(g/L)
0.15±0.06
0.16±0.03
0.12±0.04
0.127±0.037
0.12±0.03
0.11±0.03
(源自：刘秉文，1995.)
二、人血浆(清)载脂蛋白参考值比较
刘秉文于1995年对国人血浆(清)各项载脂蛋白参考值与国外参考值作了详细的比较，其报道见表18-9、18-10、18-11、18-12、18-13、18-14、18-15。
表18-8 ApoE免疫测定法的比较
RIA
ELISA
EIA
RID
ITA
抗体
P
P，M
P
P
P
灵敏度(n)
0.2～8
0.5
20
35
5
测定范围(ng)
0.8～100
0.5～6
20～200
50～300
20～400
批内CV(%)
6
4
8
5.9
2
批间CV(%)
9
8
5
7.2
5
正常值(g/L)
0.05±0.02
0.04±0.01
0.10±0.04
0.035±0.01
0.04±0.01
(源自：刘秉文，1995.)
表18-9 国人血浆ApoAⅠ含量与国外报道的比较
作者
发表时间
方法
例数
性别
年龄
均值±s(mg/dl)
张祖辉
1998
RID
307
男
20-77
122.1±13.7
刘秉文
318
女
20-77
125.5±15.9
李键斋等
1986
EIA
291
男+女
19-50
119±17
周新等*
1990
EIA
692
男
13-85
129.1±16.1
477
女
18-80
130.5±14.2
Albers等
1976
RID
20
男+女
11.5±7.3
115.7±7.3
Cheung等
1977
RID
172
男
20-65
120±20
188
女
20-65
135±25
Reman等
1978
RID
95
男
40-49
137±23
104
女
40-49
137±23
Schonfelcl等
1974
RIA
41
男
13-58
100±35
34
女
16-58
104±34
Karlin等
1976
23
男
20-39
130±3
19
女
20-39
154±6
Avogaro等
1978
EIA
60
男
20-60
128±22
60
女
20-60
134±20
Mordasini等
1980
EIA
50
男
20-60
113±9
50
女
20-60
125±17
Miller等
1980
EIA
8
男
34-70
122±27
8
女
52-68
149±20
Rosseneu等
1981
IAN
12
男
29
139±15
14
女
30
147±24
Assmann等
1982
INA
3032
男
20-65
136±23
1367
女
20-60
146±25
(源自：刘秉文，1995)
*：作者补充。
表18-10 国人血浆ApoAⅡ含量与国外报道的比较
作者
发表时间
方法
例数
性别
均值±s(mg/dl)
罗静聪
1988
RID
76
男+女
26.7±4.6
刘秉文
1988
ELISA
41
男+女
24.2±5.9
胡维诚
1987
RID
160
男+女
27.0±4.4
Curry等
1976
RID
19
男
78.0±1.7
19
女
83.0±25
Cheung等
1977
RID
172
男
33.0±5
188
女
36.0±6
Assmann等
1977
EIA
15
男
34.1±5
15
女
38.3±5.5
Schonfeld等
1977
RLA
29
男+女
40.5±8.9
Maupovic等
1981
ELA
50
男+女
68.0±18
Goldberg等
1980
RIA
50
男
25.0±1
50
女
26.0±1
De Backnev等
1982
INA
70
男+女
43.0±6.9
Zech等
1983
RID
27
男+女
24.0±0.6
Noma等
1983
RLA
27
男+女
32.0±8.3
Nukita等
1984
EIA
156
男+女
40.0±9
(源自：刘秉文，1995)
表18-11 国人血浆ApoB含量与国外报道的比较
作 者
发表时间
方法
例数
性别
均值±s(mg/dl)
周新等
1986
EIA
608
男
83.2±13.9
511
女
80.4±13.4
李健斋等
1986
EIA
727
男+女
76±19
吴兆丰、刘秉文
1987
RID
304
男
87.9±14.4
320
女
86.7±14.4
Albers等
1975
RIA
349
男+女
81.0±20
Bantorich等
1975
RIA
82
男+女
90.0±24
Bedford等
1976
RIA
128
男+女
87.0±30
Schonfeld等
1974
RIA
42
男+女
83.0±16
Brussaard等
1980
EIA
60
男+女
63±16
Fruchart等
1981
EIA
144
男+女
90
Curry等
1978
EIA
38
男
90±2.0
36
女
88±11
Curry等
1978
RID
20
男+女
87±26
Lees等
1970
RID
64
男+女
83±25
Snuderman等
1975
RID
31
男
82±22
Fievet等
1979
INA
206
男
129±31
271
女
120±34
Heuck等
1979
INA
68
男+女
82.0±23
Rossenue等
1981
INA
70
男
92±13
Durrington等
1976
INA
29
男+女
85±11
(源自：刘秉文，1995)
表18-12 国人血浆ApoCⅠ含量与国外报道的比较
作 者
发表时间
方法
例数
性别
均值±s(mg/dl)
傅明德等
1987
ELISA
202
男
7.6±2.5
214
女
8.0±2.3
Polz等
1980
RID
10
男+女
6.9±2.0
Curry等
1981
ELA
68
男+女
6.0±1.5
(源自：刘秉文，1995)
表18-13 国人血浆ApoCⅡ含量与国外报道的比较
作 者
发表时间
方法
例数
性别
均值±s(mg/dl)
傅明德等
1987
ELISA
202
男
5.2±1.9
241
女
4.9±1.8
范萍等
1989
RID
67
男+女
3.9±1.7
Schonfeld等
1979
RIA
93
男+女
3.9±1.4
Curry等
1981
EIA
68
男+女
4.0±2.0
Kashyap等
1977
RIA
32
男+女
5.0±0.4
(源自：刘秉文，1995)
表18-14 国人血清ApoCⅢ含量与国外报道的比较
作者
发表时间
方法
例数
性别
均值±s(mg/dl)
傅明德等
1988
ELISA
134
男
11.6±3.6
135
女
12.0±3.7
范萍等
1989
RID
67
男+女
12.7±3.7
刘秉文等
1987
IRA
21
男+女
9.2±2.1
Schonfeld等
1979
RID
93
男+女
15.4±6.2
Curry等
1980
ELA
54
男+女
10.9±3.0
Kashyap等
1981
RIA
29
男+女
11.1±0.9
(源自：刘秉文，1995)
表18-15 国人血浆ApoE含量与国外报道的比较
作者
发表时间
方法
例数
性别
均值±s(mg/dl)
刘铭锋、刘秉文等
1987
ELISA
42
男+女
3.57±1.24
刘铭锋、刘秉文等
1987
ELA
50
男+女
4.70±1.18
刘铭锋、刘秉文等
1992
RID
116
男
3.95±0.98
122
女
4.00±1.32
张东升、夏辉明
1991
ELISA
25
男+女
3.45±1.24
Blum等
1980
RIA
26
男+女
3.6±1.3
Gregg等
1984
RIA
12
男+女
4.8±1.2
Wesgraber等
1984
RIA
男+女
5(3.5-7.0)
(源自：刘秉文，1995)
王抒、李健斋等于1996年报道283例血清各项载脂蛋白测定值及百分位数，如表18-16、18-17、18-18所示。这批数据是目前国内采用同一份标本检测脂质、脂蛋白和载脂蛋白项目最多的1次报道。除了作为参考值供临床应用外，并阐明了各项指标之间的相关性。笔者予以抄录，供参考。
表18-16 血脂与脂蛋白水平(mmol/L)
项目
男(225例)
女(58例)
P值
TC
4.87±0.73
5.16±0.84
<0.05
TG
1.27±0.66
1.25±0.71
>0.05
HDL-C
1.41±0.35
1.54±0.36
<0.02
HDL2-C
0.56±0.17
0.63±0.19
<0.02
HDL3-C
0.86±0.23
0.91±0.19
>0.05
LDL-C
2.95±0.68
3.13±0.12
>0.05
(源自:王抒，1996)
表18-17 几项常用比值*
项 目
男
女
LDL-C/HDL-C
2.21±0.72
2.16±0.80
HDL2-C/HDL3-C
0.66±0.12
0.69±0.15
ApoB/ApoAⅠ
0.72±0.16
0.74±0.17
ApoAⅠ/ApoAⅡ
4.10±0.65
4.10±0.68
ApocⅡ/ ApoCⅢ
0.39±0.12
0.41±0.16
男女组间无显著意义
(源自：王抒，1996)
表18-18 各项载脂蛋白测定值与百分位数
项目
X±S
p5
p25
p50
p75
p95
男(225例)
ApoAⅠ(g/L)
1.42±0.17
1.17
1.30
1.43
1.51
1.72
ApoAⅡ(g/L)
0.36±0.66
0.28
0.32
0.35
0.40
0.46
ApoB(g/L)
1.01±0.21
0.72
0.86
1.00
1.14
1.38
ApoCⅠ(mg/L)
53±17
31
43
50
60
83
ApoCⅡ(mg/L)
34±16
13
24
31
42
69
ApoCⅢ(mg/L)
44±17
26
34
41
51
74
ApoE(mg/L)
44±17
26
34
41
51
74
Lp(α)(mg/L)
144125
26
53
107
185
382
女(58例)
ApoAⅠ(g/L)
1.45±0.14
1.21
1.34
1.44
1.55
1.74
ApoAⅡ(g/L)
0.36±0.06
0.26
0.33
0.36
0.39
0.44
ApoB(g/L)
1.07±0.23
0.71
0.90
1.08
1.20
1.49
ApoC(mg/L)
53±18
30
39
51
61
92
ApoCⅡ(mg/L)
41±18
20
28
38
49
77
ApoCⅢ(mg/L)
104±40
52
72
100
129
184
ApoE(mg/L)
51±18
33
37
48
58
89
Lp(α)(mg/L)
154±116
35
66
117
207
464
国内的已有报道表明，人血清载脂蛋白参考值水平尚有一定的差异。引起这种差异的原因是多方面的，目前认为主要原因有：①检测方法与仪器不同；②试剂质量尤其是抗血清技术标准不统一；③国内尚未采用完全符合国际标准的定值血清；④人群的生活习惯及种族差异。为此对于国人的血清载脂蛋白参考值的确立，尚需付出艰辛的劳动。