蛋白质含量测定
甲、钨酸沉淀法
1 试剂
1.110%钨酸钠溶液
取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。
1.2 0.33mol/L硫酸溶液
量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至100ml。
1.30.145mol/L氯化钠溶液
取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。
2 操作
2.1 钨酸除蛋白质
精确量取样品2ml加蒸馏水14ml，加10%钨酸钠2ml，0.33mol/L硫酸2ml，摇匀，静置30分钟过滤。
2.2 精确量取样品1ml，用0.145mol/L氯化钠溶液准确稀释至每ml含氮量1mg左右。
2.3 精确量取稀释液1ml及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。
3 计算
样品总氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×稀释倍数
样品非蛋白氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×12
样品蛋白质含量(g/ml)=(总氮-非蛋白氮)×6.25×1/10
附注
1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持1%。
2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。
乙、三氯醋酸沉淀法
1 2%三氯醋酸溶液
取三氯醋酸12g，加蒸馏水溶解至100ml。
2 操作
精确量取一定体积的样品(含蛋白质6～12mg左右，于10ml尖底离心管中，加等体积的12%三氯醋酸混匀，放置半小时后3000r/min离心30分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml(分数次)洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。
3 计算
(样品滴定数– 空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14
样品蛋白质含量(mg/ml)──────────────────────×6.25
样品ml数
丙、微量法(Lowry法)
1.试剂
1.1 4%碳酸钠溶液
取4g碳酸钠，加蒸馏水溶解成100ml。
1.2 0.2mol/L氢氧化钠溶液
取0.8g氢氧化钠加蒸馏水，溶解成100ml。
1.3 0.04mol/L硫酸铜溶液
取1gCuSO4·5H2O加蒸馏水溶解成100ml。
1.42%酒石酸钾(或0.1mol/L酒石酸钠)
取2g酒石酸钾(或酒石酸钠)，加蒸馏水溶解成100ml。
1.5 碱性铜液
临用前取试剂1.1和1.2各25ml，试剂1.3和1.3各0.5ml混匀配制而成。
1.6 酚试剂
称取100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25g钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)，置1500ml烧瓶中，加入700ml蒸馏水，50ml 85%磷酸及100ml浓盐酸，上联回流管(使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞)微沸加流10小时，取下回流管，加入150g硫酸锂，50ml蒸馏水，几滴溴液，煮沸约15分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。
酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度，即为酚试剂。
1.7 标准蛋白质溶液
取牛血清白蛋白标准品(由检定所统一标定发给)，准确稀释至1mg/ml(含0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml于25ml容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标准蛋白质溶液(100μg/ml)。
2 操作
2.1 样品
精确量取一定体积样品(含蛋白质50μg左右)于试管中，加5ml碱性铜液，混匀，于室温放置10分钟，快速加入0.5ml酚试剂，摇匀，于室温放置30分钟，用650nm波长或红色滤光片比色(呈色后，如发现混浊，经3000r/min离心15分钟后再比色)。
2.2 标准曲线
精确量取标准蛋白质溶液(100μg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。
3 计算
从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之ml数A；
A×0.01%
样品蛋白质含量(g/ml)= ────────
样品ml数
附注
检测A群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取1ml(含抗原3～10mg)。
1 试剂
1.110%钨酸钠溶液
取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。
1.2 0.33mol/L硫酸溶液
量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至100ml。
1.30.145mol/L氯化钠溶液
取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。
2 操作
2.1 钨酸除蛋白质
精确量取样品2ml加蒸馏水14ml，加10%钨酸钠2ml，0.33mol/L硫酸2ml，摇匀，静置30分钟过滤。
2.2 精确量取样品1ml，用0.145mol/L氯化钠溶液准确稀释至每ml含氮量1mg左右。
2.3 精确量取稀释液1ml及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。
3 计算
样品总氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×稀释倍数
样品非蛋白氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×12
样品蛋白质含量(g/ml)=(总氮-非蛋白氮)×6.25×1/10
附注
1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持1%。
2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。
乙、三氯醋酸沉淀法
1 2%三氯醋酸溶液
取三氯醋酸12g，加蒸馏水溶解至100ml。
2 操作
精确量取一定体积的样品(含蛋白质6～12mg左右，于10ml尖底离心管中，加等体积的12%三氯醋酸混匀，放置半小时后3000r/min离心30分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml(分数次)洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。
3 计算
(样品滴定数– 空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14
样品蛋白质含量(mg/ml)──────────────────────×6.25
样品ml数
丙、微量法(Lowry法)
1.试剂
1.1 4%碳酸钠溶液
取4g碳酸钠，加蒸馏水溶解成100ml。
1.2 0.2mol/L氢氧化钠溶液
取0.8g氢氧化钠加蒸馏水，溶解成100ml。
1.3 0.04mol/L硫酸铜溶液
取1gCuSO4·5H2O加蒸馏水溶解成100ml。
1.42%酒石酸钾(或0.1mol/L酒石酸钠)
取2g酒石酸钾(或酒石酸钠)，加蒸馏水溶解成100ml。
1.5 碱性铜液
临用前取试剂1.1和1.2各25ml，试剂1.3和1.3各0.5ml混匀配制而成。
1.6 酚试剂
称取100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25g钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)，置1500ml烧瓶中，加入700ml蒸馏水，50ml 85%磷酸及100ml浓盐酸，上联回流管(使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞)微沸加流10小时，取下回流管，加入150g硫酸锂，50ml蒸馏水，几滴溴液，煮沸约15分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。
酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度，即为酚试剂。
1.7 标准蛋白质溶液
取牛血清白蛋白标准品(由检定所统一标定发给)，准确稀释至1mg/ml(含0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml于25ml容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标准蛋白质溶液(100μg/ml)。
2 操作
2.1 样品
精确量取一定体积样品(含蛋白质50μg左右)于试管中，加5ml碱性铜液，混匀，于室温放置10分钟，快速加入0.5ml酚试剂，摇匀，于室温放置30分钟，用650nm波长或红色滤光片比色(呈色后，如发现混浊，经3000r/min离心15分钟后再比色)。
2.2 标准曲线
精确量取标准蛋白质溶液(100μg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。
3 计算
从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之ml数A；
A×0.01%
样品蛋白质含量(g/ml)= ────────
样品ml数
附注
检测A群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取1ml(含抗原3～10mg)。