第六节 免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否合适，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使以后的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能有一种适用于所有抗原的固定剂，而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下，供参考。
一、固定剂的选择及固定时间(详见表5-9)
(1)Karovsky＇s 液pH7.3。
(2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)
配制见附录一。
表5-9 各种抗原固定剂的选择及固定时间
待检抗原
固定剂的种类
固定时间
蛋白质
酶
冰冻切片不固定，或用95%乙醇，B5固定液
10 min
激素
冰冻切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲
10 min
醇，乙醇，PEG固定，B5固定液固定
4℃30 min
免疫球蛋白
中性福尔马林，四氯化碳(1%甲醛)
30 min
白蛋白
95%乙醇含1～5%冰醋酸
30 min
纤维蛋白元
同上
30 min
病毒
丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚
30 min
糖蛋白
PLP，丙酮
30 min
脂质Forssman
中性福尔马林
20 min
抗原
2.5%硫代硫酸钠，冰冻切片不固定
20 min
免疫电镜
PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等
30min
二、切片的处理与粘附
免疫组化染色过程较长，洗的次数很多，而且均在振荡洗涤，抗原片附贴不紧，往往在最后的时刻，还没有等显色就会脱落导致前功尽弃，这个环节 虽小却会影响大局，因此，为了保证切片染色成功必须把切片处理好，解除掉片的后顾之忧(方法见第一章 )。
一、固定剂的选择及固定时间(详见表5-9)
(1)Karovsky＇s 液pH7.3。
(2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)
配制见附录一。
表5-9 各种抗原固定剂的选择及固定时间
待检抗原
固定剂的种类
固定时间
蛋白质
酶
冰冻切片不固定，或用95%乙醇，B5固定液
10 min
激素
冰冻切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲
10 min
醇，乙醇，PEG固定，B5固定液固定
4℃30 min
免疫球蛋白
中性福尔马林，四氯化碳(1%甲醛)
30 min
白蛋白
95%乙醇含1～5%冰醋酸
30 min
纤维蛋白元
同上
30 min
病毒
丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚
30 min
糖蛋白
PLP，丙酮
30 min
脂质Forssman
中性福尔马林
20 min
抗原
2.5%硫代硫酸钠，冰冻切片不固定
20 min
免疫电镜
PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等
30min
二、切片的处理与粘附
免疫组化染色过程较长，洗的次数很多，而且均在振荡洗涤，抗原片附贴不紧，往往在最后的时刻，还没有等显色就会脱落导致前功尽弃，这个环节 虽小却会影响大局，因此，为了保证切片染色成功必须把切片处理好，解除掉片的后顾之忧(方法见第一章 )。