第二节 寄生虫人工培养
本书仅介绍三种原虫的人工培养。
一、溶组织内阿米巴培养。
1.营养琼脂双相培养基
⑴固体部分：牛肉浸膏3g；蛋白胨5g；琼脂 15g；液体1000ml(见“液体部分”)。
⑵液体部分：氯化钠8g；氯化钾0.2g；氯化钙0.2g；氯化镁0.01g；磷酸氢二钠2g；磷酸二氢钾0.3g；蒸馏水1000ml。
制备先配液体部分2000ml，氯化钙与氯化镁另装小瓶，高压灭菌(压力6.81公斤20分钟)后冷却，合并一起，取1000ml配固体部分，经沸水浴2～3小时，使完全溶解。若有残渣可用4层纱布过滤除去，趁热将滤液分装试管，每管5ml，高压灭菌，形成斜面，冷却后放冰箱中备用。接种前，每管加液体部分4.5ml和牛血清0.5ml，并加米粉20mg(用大米粉分装小管，经180℃烤箱消毒3次)。
2.洛克氏液鸡蛋血清培养基
⑴培基成分：洛克氏液70ml；灭活血清(每管加0.5ml)；米粉(每管加20mg)；鸡蛋4个。
⑵洛克氏(Locke)液：氯化钠9g；氯化钙0.2g；氯化钾0.4g；碳酸氢钠0.2g；葡萄糖(压力3.63公斤15分钟)2.5g；蒸馏水1000ml。
制备先配洛克氏液1000ml，取鸡蛋用肥皂水洗刷净，以70%酒精洗净后，破壳将蛋黄、蛋清倾入含70ml洛克氏液的小三角烧瓶内，加有玻璃珠，充分摇动使其内含物混合，之后分装消毒试管内，每管约5ml，置斜位在70℃下经1小时凝固斜面，翌日再置高压消毒20分钟。接种前每管加洛克氏液4.5ml、马血清0.5ml、米粉20mg。
二、阴道毛滴虫培养
常用肝-胨-糖培养基的培养方法。
1.培养基的配制：15%肝浸液100ml；蛋白胨2g；葡萄糖0.5g。
将以上成分混合，加热使溶，经滤纸过滤，调节pH至5.5～6.0。每管分装5ml，8磅20分钟高压灭菌，冷却后，置37℃恒温箱中24小时，证明无菌后，贮存于冰箱备用。接种前每管加灭能无菌马血清1ml，即可用。
15%肝浸液的制备：取牛或兔肝15g，洗净，剪碎如小米粒大小，浸入100ml，蒸馏水中，置冰箱过夜，次日煮沸半小时，用4层纱布过滤除去渣滓，补充蒸馏水至100ml，即成15%肝浸液。
2.培养方法①以无菌棉拭从阴道后穹窿处取分泌物，无菌接种入上述的培养基中；②初次接种和第1、2次转种时，应加青霉素5～10万单位/2ml培基；③培养温度为35～38℃为宜；④pH在5.4～6.8之间。
一、溶组织内阿米巴培养。
1.营养琼脂双相培养基
⑴固体部分：牛肉浸膏3g；蛋白胨5g；琼脂 15g；液体1000ml(见“液体部分”)。
⑵液体部分：氯化钠8g；氯化钾0.2g；氯化钙0.2g；氯化镁0.01g；磷酸氢二钠2g；磷酸二氢钾0.3g；蒸馏水1000ml。
制备先配液体部分2000ml，氯化钙与氯化镁另装小瓶，高压灭菌(压力6.81公斤20分钟)后冷却，合并一起，取1000ml配固体部分，经沸水浴2～3小时，使完全溶解。若有残渣可用4层纱布过滤除去，趁热将滤液分装试管，每管5ml，高压灭菌，形成斜面，冷却后放冰箱中备用。接种前，每管加液体部分4.5ml和牛血清0.5ml，并加米粉20mg(用大米粉分装小管，经180℃烤箱消毒3次)。
2.洛克氏液鸡蛋血清培养基
⑴培基成分：洛克氏液70ml；灭活血清(每管加0.5ml)；米粉(每管加20mg)；鸡蛋4个。
⑵洛克氏(Locke)液：氯化钠9g；氯化钙0.2g；氯化钾0.4g；碳酸氢钠0.2g；葡萄糖(压力3.63公斤15分钟)2.5g；蒸馏水1000ml。
制备先配洛克氏液1000ml，取鸡蛋用肥皂水洗刷净，以70%酒精洗净后，破壳将蛋黄、蛋清倾入含70ml洛克氏液的小三角烧瓶内，加有玻璃珠，充分摇动使其内含物混合，之后分装消毒试管内，每管约5ml，置斜位在70℃下经1小时凝固斜面，翌日再置高压消毒20分钟。接种前每管加洛克氏液4.5ml、马血清0.5ml、米粉20mg。
二、阴道毛滴虫培养
常用肝-胨-糖培养基的培养方法。
1.培养基的配制：15%肝浸液100ml；蛋白胨2g；葡萄糖0.5g。
将以上成分混合，加热使溶，经滤纸过滤，调节pH至5.5～6.0。每管分装5ml，8磅20分钟高压灭菌，冷却后，置37℃恒温箱中24小时，证明无菌后，贮存于冰箱备用。接种前每管加灭能无菌马血清1ml，即可用。
15%肝浸液的制备：取牛或兔肝15g，洗净，剪碎如小米粒大小，浸入100ml，蒸馏水中，置冰箱过夜，次日煮沸半小时，用4层纱布过滤除去渣滓，补充蒸馏水至100ml，即成15%肝浸液。
2.培养方法①以无菌棉拭从阴道后穹窿处取分泌物，无菌接种入上述的培养基中；②初次接种和第1、2次转种时，应加青霉素5～10万单位/2ml培基；③培养温度为35～38℃为宜；④pH在5.4～6.8之间。
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实验技术
第二十一章 寄生虫学实验技术
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