现在位置:医学图书 > 100md首页 > 医学 > 基础医学 图书编号:22630903
 
《实验病理学技术图鉴》
作者:潘琳 主编
出版社:科学出版社 出版日期:2012/1/1
ISBN:9787030328939 定价: 380.00元
        内容推荐

    《实验病理学技术图鉴》共21章。实验病理学技术图鉴注重实验病理技术的规范化,为读者供了多系统主要疾病动物模型的复制方法,用简洁图表及1500余幅原创的实验照片,清晰直观地介绍了不同种属动物组织的切片、染色制样流程,阐释了组织损伤的性质、程度,使读者较易掌握如何进行实验和结果评判,帮助青年医师、研究生少走弯路,培养严谨的科学态度,提高实验水平,减少科研资源浪费。此外,实验病理学技术图鉴还介绍了作者积累的心得和改良的技术方法,对读者具有启迪性。

    实验病理学技术图鉴是实验病理学技术的工具书,也是生命科学领域具有重要应用价值的参考书。

    作者简介

    潘琳、赵天德、潘子昂、曲木诗玮、郑振辉、彭瑞云、郭崇洁

    目录

    第一章 实验动物学基础

    第一节 实验动物学基本概念及发展概况

    第二节 人类疾病动物模型的制作

    第三节 动物实验基本技术与方法

    第四节 实验动物的麻醉

    第五节 实验动物给药途径与方法

    第六节 实验动物血和体液的采集

    第七节 动物福利与实验动物安死术

    第二章 实验病理学基础

    第一节 实验病理学导言

    第二节 实验动物解剖与取材

    第三节 实验病理制片技术

    第四节 实验技术操作通则与仪器使用通则

    第五节 实验病理研究显微读片通则

    第六节 实验室管理与实验环境安全

    第三章 循环系统疾病实验病理技术

    第一节 心血管解剖组织学概述

    第二节 心血管疾病病理生理概述及动物模型

    第三节 心血管解剖取材固定方法

    第四节 心血管脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 大鼠、小鼠主动脉根部及主动脉瓣定位切片方法

    第六节 心血管疾病标本大体染色技术

    第七节 特殊染色技术的应用

    第八节 免疫组织化学技术的应用

    第九节 组织化学技术的应用

    第十节 病理读片与分析方法

    第十一节 不理想制片的原因与对策

    第四章 呼吸系统疾病实验病理技术

    第一节 气管、支气管、肺解剖组织学概述

    第二节 呼吸系统疾病动物模型

    第三节 气管、肺解剖取材与固定

    第四节 气管、肺脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色技术的应用

    第六节 免疫组织化学技术的应用

    第七节 病理读片与分析方法

    第八节 不理想制片的原因与对策

    第五章 消化系统疾病实验病理技术

    第一节 食管、胃、肠、肝解剖组织学概述

    第二节 消化系统疾病动物模型

    第三节 食管、胃、肠、肝解剖取材与固定

    第四节 食管、胃、肠、肝脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色技术的应用

    第六节 免疫组织化学技术的应用

    第七节 病理读片与分析方法

    第八节 不理想制片的原因与对策

    第六章 泌尿系统疾病实验病理技术

    第一节 肾、输尿管、膀胱解剖组织学概述

    第二节 泌尿系统常见疾病动物模型

    第三节 肾、输尿管、膀胱解剖取材与固定

    第四节 肾、输尿管、膀胱脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色技术的应用

    第六节 免疫组织化学技术的应用

    第七节 病理读片与分析方法

    第八节 肾活检病理技术

    第九节 不理想制片的原因与对策

    第七章 生殖系统和乳腺疾病实验病理技术

    第一节 睾丸、附睾、输精管、前列腺、阴茎解剖组织学概述

    第二节 卵巢、输卵管、子宫、阴道、乳腺解剖组织学概述

    第三节 生殖系统疾病动物模型

    第四节 睾丸、附睾、输精管、前列腺、精囊、阴茎解剖取材与固定

    第五节 睾丸、附睾、输精管、前列腺、精囊、阴茎脱水透明浸蜡包埋制片流程

    第六节 卵巢、输卵管、子宫、阴道、乳腺解剖取材与固定

    第七节 子宫、阴道、卵巢、输卵管、乳腺脱水浸蜡包埋制片流程

    第八节 特殊染色与免疫组织化学技术的应用

    第九节 病理读片与分析方法

    第十节 不理想制片的原因与对策

    第八章 内分泌系统疾病实验病理技术

    第一节 甲状腺、甲状旁腺、肾上腺、垂体解剖组织学概述

    第二节 内分泌、营养代谢性疾病动物模型

    第三节 甲状腺、肾上腺、垂体解剖取材与固定

    第四节 甲状腺、肾上腺、垂体脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色及免疫组织化学技术的应用

    第六节 不理想制片的原因与对策

    第九章 脂肪组织实验病理技术

    第一节 脂肪解剖组织学概述

    第二节 肥胖病理生理与动物模型

    第三节 脂肪组织解剖取材与固定

    第四节 脂肪组织脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色技术的应用

    第六节 免疫组织化学技术的应用

    第七节 病理读片与分析方法

    第八节 不理想制片的原因与对策

    第十章 中枢神经系统疾病实验病理技术

    第一节 中枢神经系统解剖组织学概述

    第二节 神经系统常见疾病动物模型

    第三节 大脑、小脑、脊髓、神经根、神经节解剖取材与固定

    第四节 大脑、小脑、脊髓、神经根、神经节脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 大鼠大脑内核团定位切片技术

    第六节 特殊染色技术的应用

    第七节 免疫组织化学技术的应用

    第八节 病理读片与分析方法

    第九节 脑血管畸形比较病理形态学

    第十节 不理想制片的原因与对策

    第十一章 周围神经及肌肉疾病实验病理技术

    第一节 周围神经及骨骼肌解剖组织学概述

    第二节 周围神经及肌病动物模型

    第三节 骨骼肌、外周神经解剖取材固定

    第四节 骨骼肌、神经节、外周神经脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 骨骼肌冷冻切片技术

    第六节 特殊染色技术的应用

    第七节 免疫组织化学技术的应用

    第八节 组织化学技术的应用

    第九节 病理读片与分析方法

    第十节 肌肉活检比较病理形态学

    第十一节 不理想制片的原因与对策

    第十二章 骨、软骨、关节疾病实验病理技术

    第一节 骨、软骨、关节、滑膜解剖组织学概述

    第二节 骨、软骨、关节疾病常见动物模型

    第三节 骨、软骨、关节、滑膜解剖取材与固定

    第四节 骨组织脱钙流程

    第五节 骨、软骨、关节、滑膜脱水浸蜡包埋制片流程

    第六节 骨、软骨整体染色技术方法

    第七节 特殊染色技术的应用

    第八节 免疫组织化学技术的应用

    第九节 病理读片与分析方法

    第十节 不理想制片的原因与对策

    第十三章 免疫系统疾病实验病理技术

    第一节 胸腺、脾、淋巴结解剖组织学概述

    第二节 免疫系统疾病动物模型

    第三节 胸腺、脾、淋巴结解剖取材固定

    第四节 胸腺、脾、淋巴结脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色及免疫组织化学技术应用

    第六节 不理想制片的原因与对策

    第十四章 皮肤疾病实验病理技术

    第一节 皮肤解剖组织学概述

    第二节 皮肤疾病动物模型

    第三节 皮肤解剖取材与固定

    第四节 皮肤脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色技术的应用

    第六节 免疫组织化学技术的应用

    第七节 病理读片与分析方法

    第十五章 眼部疾病实验病理技术

    第一节 眼解剖组织学概述

    第二节 眼疾病动物模型

    第三节 眼球壁、晶体、视网膜、泪腺解剖取材与固定

    第四节 眼球壁、晶体、视网膜、泪腺脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色及免疫组织化学技术的应用

    第六节 大鼠、家兔视网膜毛细血管消化铺片技术

    第七节 病理读片与分析方法

    第八节 不理想制片的原因与对策

    第十六章 糖尿病实验病理技术

    第一节 胰腺解剖组织学概述

    第二节 糖尿病动物模型

    第三节 胰腺解剖取材与固定

    第四节 胰腺脱水浸蜡包埋制片流程

    第五节 特殊染色技术的应用

    第六节 免疫组织化学技术的应用

    第七节 病理读片与分析方法

    第八节 不理想制片的原因与对策

    第九节 血糖检测与目眦静脉采血方法

    第十节 正常葡萄糖-高胰岛素钳夹术方法

    第十七章 肿瘤学实验病理技术

    第一节 肿瘤学动物模型概述

    第二节 肿瘤解剖取材与固定

    第三节 肿瘤脱水浸蜡包埋制片流程

    第四节 特殊染色技术的应用

    第五节 免疫组织化学技术的应用

    第六节 病理读片与分析方法

    第七节 不理想制片的原因与对策

    第十八章 细胞培养形态学技术

    第一节 培养细胞基本概念

    第二节 人羊膜细胞分离培养及鉴定

    第三节 人胚胎干细胞培养及分化全能性鉴定

    第四节 大鼠胰岛A细胞分离与培养

    第五节 胰岛A、B细胞株培养

    第六节 Atrophin-1全长基因真核表达细胞模型

    第七节 原代成骨细胞的培养

    第八节 定位细胞培养

    第九节 培养细胞形态学研究方法

    第十节 小鼠胚胎与细胞团块制片技术

    第十一节 整装细胞免疫组化结果判读误区

    第十九章 分子病理学技术

    第一节 原位核酸分子杂交基本原理

    第二节 原位核酸分子杂交技术

    第三节 荧光原位杂交技术

    第四节 原位PCR技术

    第五节 常备试剂的配制

    第六节 影响原位杂交的因素与对策

    第二十章 形态定量分析技术

    第一节 体视学概述

    第二节 体视学基本原理和方法

    第三节 形态计量学理论和实践

    第四节 生物医学图像分析技术

    第五节 Image-Pro Plus(IPP)图像处理分析软件

    第六节 定量技术应用领域及注意事项

    第二十一章 电子显微镜技术

    第一节 透射电子显微镜技术

    第二节 扫描电子显微镜技术

    第三节 电镜的维护与保养

    参考文献

    附录1 常用试剂配制方法

    附录2 英汉实验病理学技术词汇

    在线试读部分章节

    第一节 实验动物学基本概念及发展概况Section1 BasicConceptsandHistoryofLaboratoryAnimalScience

    一、实验动物、实验用动物和实验动物学

    实验动物是指经人工培育、遗传背景清楚、对其进行微生物与寄生虫学控制,用于科学实验、教学以及药品和生物制品检定与生产的动物。

    实验用动物是指用于动物实验的动物,主要包括人工培育的实验动物、野生动物、家畜、家禽等。

    实验动物学是研究实验动物及其应用的科学。实验动物学现已发展成为一门独立的、综合性的基础学科。半个多世纪以来,实验动物学以相关科学为基础,结合自身特点,从理论和实践两个方面不断丰富学科内容,加强学科建设,逐渐形成了完整的学科理论体系。实验动物学既是生命科学和现代生物学研究的基础和重要支撑条件,也是生命科学的重要组成部分。

    二、实验动物学发展概况

    实验动物学的形成是从动物实验开始的。最早有文字记载的原始动物实验可追溯到公元前4世纪。古希腊哲学家和医学家亚里士多德(Aristotle,公元前384~前322)通过对动物的解剖了解动物的内在差别。

    公元2世纪,古罗马医学家盖伦(Galen,129~199)总结了前人做过的若干实验并通过用猪、猴等动物进行实验,创立了医学知识和生物学知识体系,提出实验研究是科学发展的基础。

    通过动物实验,人们获得了许多生物医学上的重大发现。例如,英国医生哈维(WilliamHarvey,1578~1657)采用狗、蛙、蛇、鱼和其他动物进行了一系列的动物实验,发现了血液循环及心脏在血液循环中的作用。

    德国细菌学家科赫(RobertK迸ch,1843~1910)采用牛、羊和其他动物做实验,发现了结核杆菌。他发明用固体培养基的“细菌纯培养法”,首先采用染色观察细菌的形态,并运用这些方法分离出炭疽杆菌、结核杆菌和霍乱杆菌,同时确证这些细菌与疾病的关系,提出了“科赫原则”,作为判断某种微生物是否为某种疾病的病原的准则。

    法国微生物学家、化学家、近代微生物学的奠基人巴斯德(LouisPasteur,1822~1895)在研究蚕病、鸡霍乱和炭疽病中,证实传染病是由病原微生物所引起,奠定了医学微生物学的基础。

    法国生理学家贝尔纳(ClaudeBernard,1813~1878)做了大量动物实验,有许多重要发现,如胰液在脂肪消化中的作用、美洲箭毒在麻痹骨骼肌中的作用等。特别重要的是,他发现了肝的产糖功能和血管运动神经。

    德国细菌学家莱夫勒(FriedrichLoffler,1852~1915)做了大量动物实验。虽经多次失败,但最后证实增加细菌培养时间能够制成毒性很大的滤液。这一发现导致了预防白喉的免疫法,并使抗血清用于治疗(1890年,VonBehring发现患白喉病愈后豚鼠的血清中含有某种物质,可以保护其他豚鼠),从而开始了抗

    AtlasofExperimentalPathologyTechniques

    毒素治疗的新时代。

    20世纪以来,动物实验在生命科学研究中的应用越来越广泛。为了提高动物实验的科学性、准确性和可重复性,人们开始有选择、有目的地开发某些动物的新品种、品系,并对实验动物开展系统的研究,对实验动物进行微生物学和寄生虫学控制,进而对实验动物病理学、营养学、生态学、比较医学、管理学、福利学、实验技术、模型制备等进行不断深入的探讨,取得一系列突破性进展。

    1909年,美国Jackson实验室Little博士育成了世界上第一个近交系动物(DBA近交系小鼠)。从此以后,各国科学家先后培育出一系列近交系动物、突变系动物、杂交一代动物,总结并探索出一整套实验动物选种、育种、保种等繁殖技术,从而奠定了实验动物遗传学基础。

    1945年,美国圣母大学Lobund实验室JAReynier博士培育出无菌大鼠。1955年,无菌小鼠和无菌豚鼠先后培育成功。在这个基础上,实验动物科学工作者把环境控制、空气净化、自动控制、建筑工程等工程技术运用到动物实验设施的建设方面。实验动物屏障系统、隔离系统得到有效的应用和发展,同时也奠定了实验动物环境生态学的基础。

    三、基因修饰技术在实验动物学领域的应用

    通过导入外源基因对生物体的某一或某些性状进行改良的技术被称为基因修饰技术。通过基因修饰技术获得的含外源基因的生物体称为遗传工程体或转基因生物,包括转基因植物、转基因动物和转基因微生物。基因修饰技术主要采用转基因技术和基因打靶技术。

    基因修饰技术在实验动物科学领域的应用主要体现在以下方面:

    (一)为建立人类疾病动物模型开辟了新的途径

    人类疾病动物模型是研究人类疾病,特别是人类疑难病、遗传性疾病、传染病等最常用的实验材料和手段。某些病毒在动物身上不易感染,某些遗传性疾病、复合性疾病用自发突变、化学诱变等常规方法很难建立所需要的动物模型,而基因修饰技术则提供了新的方法。目前,利用基因修饰技术已经成功地构建了许多疾病的理想动物模型。例如,乙型肝炎病毒感染转基因小鼠模型、人血红蛋白β链突变转基因小鼠模型、高胆固醇血症转基因小鼠模型、乳腺癌转基因小鼠模型、囊性纤维化转基因小鼠模型及动脉粥样硬化、痴呆症、自身免疫病、淋巴系统病、真皮炎、前列腺癌等多种疾病的模型动物。

    (二)为培育实验动物新品系提供了简单、方便的新方法

    传统的遗传育种方法培育实验动物新品系是一项很复杂的工作,需要的时间很长。利用基因修饰技术中的单亲纯合双倍体动物育成技术,可大大加快动物新品种的培育。使过去需要几十年,甚至上百年才能育成的实验动物,现在只用一年左右的时间就可完成,并可在纯合过程中,解决致死基因造成的胚胎期死亡问题。

    四、动物伦理

    随着社会的进步和人类文明程度的不断提高,人与自然、人与动物的关系都被纳入到伦理学研究的范畴,因而出现环境伦理、生命伦理和动物伦理等学科。动物伦理学研究的是人类道德及人与动物之间的关系,如人类应该如何科学地认识动物、如何仁道地对待动物、如何合理地利用动物、如何保护动物等。

    动物伦理是在保证动物实验结果科学、可靠的前提下,针对人的活动对动物所产生的影响,从伦理方面研究保护动物的必要性。它所关注的是人类对实验动物抱什么态度的问题,是人类对动物实验深层反思,主要研究人类对动物实验伦理责任,其中包括:实验动物自身价值研究、人类对动物实验道德原则的确立与道德行为规范的研究、现实科学研究活动中动物实验问题的研究等。

    动物和人类一样是有血有肉的生命体,一样有感知、感情和喜怒哀乐。使用动物进行实验,将不同程度

    第一章 实验动物学基础Chapter1 AnIntroductiontoLaboratoryAnimalScience

    地造成动物肉体或精神上的伤害。为此,人们正在努力寻求动物实验的替代方法,以避免或减少动物实验。与此同时,人们也在寻求避免或减轻动物痛苦的方法。例如,在进行可能造成动物疼痛的实验时,首先进行麻醉处理;在动物出现剧烈疼痛而无法缓解时,以仁慈终点结束实验,并采用安死术处死动物等。

    (郑振辉)

    第二节 人类疾病动物模型的制作Section2 AnimalModelsofHumanDiseases

    一、人类疾病动物模型的定义

    人类疾病的动物模型(animalmodelsofhumandiseases)是指在生物医学科学研究中所建立的具有人类疾病模拟性表现的动物实验对象和材料。使用动物模型是现代生物医学研究中的一个极为重要的实验方法和手段,有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生、发展规律和研究防治措施。动物模型是实验假说和临床假说两者的试验基础。人类各种疾病的发生发展是十分复杂的,要深入探讨其疾病的发病机制及疗效机制的实验不可能或不应该在病人身上进行。只能通过对动物各种疾病和生命现象的研究,进而推用到人类。

    二、动物模型的复制原则及注意事项

    (一)复制原则

    在生物医学研究中要进行疾病及疗效机制的实验,常要依赖于复制动物模型。在复制动物模型时一定要进行周密的设计,设计时要遵循下列一些原则:

    1畅相似性 在动物身上复制人类疾病模型。目的在于从中找出可以推广(外推)并应用于病人的有关规律。外推法要冒风险,因为动物与人类到底不是同类。例如,在动物身上无效的药物不等于临床无效,反之亦然。因此,设计动物疾病模型的一个重要原则是,所复制的模型应尽可能近似于人类疾病的状况,能够找到与人类疾病相同的动物自发性疾病当然最好。例如,自发性高血压大鼠与原发性高血压病人非常相似,是研究人类原发性高血压的理想模型;老母猪自发性冠状动脉粥样硬化是研究人类冠心病的理想模型;自发性狗类风湿关节炎与人类幼年型类风湿关节炎十分相似,也是一种理想模型。与人类完全相同的动物自发性疾病模型毕竟不可多得,往往需要人工加以复制。为了尽量做到与人类疾病相似,首先要注意动物的选择。例如,鸡最适宜做高脂血症的模型,因为它的血浆三酰甘油、胆固醇及游离脂肪酸水平与人类十分相似,低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白的脂质构成也与人类相似。其次,为了尽可能做到模型与人类相似,还要在实践中对方法不断加以改进。例如,结扎兔阑尾血管,固然可能使阑尾坏死穿孔并导致腹膜炎,但这与人类急性梗阻性阑尾炎合并穿孔并导致腹膜炎不一样,如果给兔结扎阑尾基部而保留原来的血液供应,由此而引起的阑尾穿孔及腹膜炎就与人类疾病相似程度较强,因而是一种比较理想的方法。

    为了判定所复制的模型是否与人类相似,需要进行一系列的检查。例如,通过检查动脉压、脉率、静脉压、呼吸频率、动脉血pH、动脉氧分压和二氧化碳分压、静脉血乳酸盐浓度及血容量等指标,发现一次定量放血法造成的休克动物模型与临床病人出血性休克十分相似,因此认为这种方法复制的模型是一种较理想的模型。

    2畅重复性 理想的动物模型应该是可重复的,甚至是可以标准化的。例如,用一次定量放血法可百分之百造成出血性休克,百分之百死亡,这就符合可重复性并达到了标准化要求。又如,用狗做心肌梗死模型似乎很合适,因为它的冠状动脉循环与人类相似,而且在实验动物中,它最适宜做暴露心脏的剖胸手术,但

    实验病理学技术图鉴

    AtlasofExperimentalPathologyTechniques

    狗结扎冠状动脉的结果差异太大,不同狗同一动脉同一部位的结扎,其结果很不一致,无法预测,无法标准化。相反,大鼠、小鼠、地鼠和豚鼠结扎冠脉的结果就比较稳定一致,可以预测,因而可以标准化。

    为了增强动物模型复制时的重复性,必须在动物品种、品系、年龄、性别、体重、健康情况、饲养管理;实验条件、环境条件、季节、昼夜节律、应激、室温、湿度、气压、消毒灭菌;实验方法步骤;药品生产厂家、批号、纯度规格、给药剂型、剂量、途径、方法;麻醉、镇静、镇痛等用药情况;仪器型号、灵敏度、精确度;实验者操作技术熟练程度等等方面保持一致,因为一致性是重复性的可靠保证。

    3畅可靠性 复制的动物模型还应该力求可靠地反映人类疾病,即可特异地、可靠地反映某种疾病或某种功能、代谢、结构变化,应具备该种疾病的主要症状和体征,经化验或X线摄片、心电图、病理切片等证实。若易自发地出现某些相应病变的动物,就不应加以选用,易产生与复制疾病相混淆的疾病者也不宜选用。例如,铅中毒可用大白鼠做模型,但有缺点,因为大鼠本身容易患动物地方性肺炎及进行性肾病,后者容易与铅中毒所致的肾病相混淆,不易确定该肾病是铅中毒所致还是它本身的疾病所致。用蒙古沙土鼠就比较容易确定,因为一般只有铅中毒才会使它出现相应的肾病变。

    4畅适用性和可控性 供医学实验研究用的动物模型,在复制时应尽量考虑到今后临床应用和便于控制其疾病的发展,以利于研究的进一步开展。例如,雌激素能终止大鼠和小鼠的早期妊娠,但不能终止人的妊娠。因此,选用雌激素复制大鼠和小鼠终止早期妊娠的模型是不适用的,因为在大鼠和小鼠筛选带有雌激素活性的药物时,常常会发现这些药物能终止妊娠,似乎可能是有效的避孕药,但一旦用于人类,则并不成功。所以,如果知道一个化合物具有雌激素活性,用这个化合物在大鼠或小鼠观察终止妊娠的作用是没有意义的。又如,选用大鼠和小鼠做实验性腹膜炎就不适合,因为它们对革兰阴性细菌具有较高的抵抗力,很不容易造成腹膜炎。有的动物对某致病因子特别敏感,极易死亡,也不适用。例如,狗腹腔注射粪便滤液引起腹膜炎很快死亡(80%24小时内死亡),来不及做实验治疗观察,而且粪便剂量及细菌菌株不好控制,因此不能准确重复实验结果。

    5畅易行性和经济性 在复制动物模型时,采用的方法应尽量做到容易执行和合乎经济原则。灵长类动物与人类最近似,复制的疾病模型相似性好,但稀少昂贵,即使猕猴亦不可多得,更不用说猩猩、长臂猿了。幸好很多小动物(如大鼠、小鼠、地鼠、豚鼠等)也可以复制出十分近似于人类疾病的模型。它们容易做到遗传背景明确、体内微生物可加以控制、模型性显著且稳定,年龄、性别、体重等可任意选择,而且价廉易得,便于饲养管理,因此可尽量采用。除非不得已或一些特殊疾病(如脊髓灰质炎)研究需要外,尽量不用灵长类动物。除了在动物选择上要考虑易行性和经济性原则外,在模型复制的方法上、指标的观察上也都要注意这一原则。

    (二)注意事项

    1畅注意模型要尽可能再现所要求的人类疾病 复制模型时,必须强调从研究目的出发,熟悉诱发条件、宿主特征、疾病表现和发病机制,充分了解所需动物模型的全部信息,分析是否能得到预期的结果。为了增加所复制的动物疾病模型与人类疾病的相似性,应尽量选用各种敏感动物与人类疾病相应的动物模型。同时要注意所选用动物的实用价值,应适用于大多数研究者使用,容易复制,实验中便于操作和采集各种标本。例如,诱发动脉粥样硬化时,草食类动物需要的胆固醇剂量比人类高得多,而且病变部位并不出现在主动脉弓,病理表现为纤维组织和平滑肌增生为主,可有大量泡沫样细胞形成斑块,这与人类的情况差距较大。因此要求研究者懂得各种动物所需的诱发剂量、宿主年龄、性别和遗传性状等对实验的影响,以及动物疾病在组织学、生物化学、病理学等方面与人类疾病之间的差异。要避免选用与人类对应器官相似性很小的动物疾病作为模型材料。为了增加所复制动物疾病模型与人类疾病的相似性,应尽量选用各种敏感动物与人类疾病相应的动物模型。

    2畅注意环境因素对模型动物的影响 复制模型的成败往往与环境的改变有密切关系。拥挤、饮食改变、过度光照、噪声、屏障系统的破坏等,任何一项被忽视都可能给模型动物带来严重影响。除此以外,复制过程中固定、出血、麻醉、手术、药物和并发症等处理不当,同样会产生难以估量的恶果。因此,要求尽可能使模型动物处于最小的变动和最少的干扰之中。

    第一章 实验动物学基础Chapter1 AnIntroductiontoLaboratoryAnimalScience

    3畅动物进化的高级程度并不意味着所有器官和功能接近于人类 复制动物模型时,在条件允许的情况下,应尽量考虑选用与人类相似、进化程度高的动物作模型。但不能因此就认为进化程度越高等的动物其所有器官和功能越接近于人类。例如,非人灵长类诱发动脉粥样硬化时,病变部位经常在小动脉,即使出现在大动脉也与人类分布不同。用鸽做这类模型时,胸主动脉出现的黄斑面积可达10%,镜下变化与人类也比较相似,因此也被研究者广泛使用。

    4畅注意所选用动物的实用价值 第一,模型应适于多数研究者使用,容易复制,实验中便于操作和采集各种标本。第二,应该首选一般饲养员较熟悉且便于饲养的动物作研究对象,这样就无需特殊的饲养设施和转运条件,经济上和技术上容易得到保证。第三,动物来源必须充足,选用多胎分娩的动物对扩大样本和重复实验是有益的。第四,对慢性疾病模型来说,动物须有一定的生存期,便于长期观察使用,以免模型完成时动物已濒于死亡或毙于并发症。野生动物在自然环境中观察有助于正确评价自然发病率和死亡率,但记录困难,在实验条件下维持有一定难度,且对人和家畜有直接和间接的威胁,使用时要特别加以注意。复制模型时必须注意动物种群的选择,要了解各类动物种群的特点和对复制动物的影响。

    5畅正确地评估动物的疾病模型 应该懂得没有一种动物模型能完全复制人类疾病的真实情况,动物毕竟不是人类的缩影。模型实验只是一种间接性研究,只可能在一个局部或几个方面与人类疾病相似。因此,模型实验结论的正确性只是相对的,最终必须在人体上得到验证。

    复制过程中一旦出现与人类疾病不同的情况,必须分析其分歧范围和程度,找到相平行的共同点,正确评估哪些是有价值的。

    (郑振辉)

    第三节 动物实验基本技术与方法Section3 AnimalExperimentTechniques

    一、实验动物编号的标记法

    动物标记的目的在于根据动物的记号或特征编号来进行个体识别。良好的标记方法应保证号码清楚、简便易认和耐久使用。应使用对动物无毒性、操作简单且长时间能够识别的方法。

    为了观察每个实验动物的反应情况,必须对实验动物进行编号、标记。标记的原则应保证动物身体上的标记号码简便、易认、清楚、耐久和适用。动物编号的方法有多种,如涂染法、打孔法、剪缺口法、挂牌法、剪毛法、针刺法等。

    (一)涂染法

    涂染法是用染料、化学剂在动物身体明显部位(如被毛、四肢等)进行涂染或用不同颜色来区别。大鼠、小鼠模型常用涂染法编号标记。常用于编号涂染的试剂有:3%~5%苦味酸溶液(涂染黄色)、0畅5%品红溶液(涂染红色)、煤焦油的酒精溶液(涂染黑色)、甲紫溶液(涂染成紫色)。编号顺序原则是先左后右,从前到后。对于较复杂的大型实验,需要很多只动物模型。在需要上百或数百只小鼠时,如在一只小鼠身上编满号涂满颜色,长时间后经动物之间相互蹭搓,标记变模糊更不易区别,现介绍一种简便易行的编号方法,只要在小鼠或大鼠身上最显著的1~7处涂抹颜色,就能方便并清晰地区分1~100编号的小鼠,同理再改换不同的颜色,可以给数百上千的小鼠进行编号。具体做法如下:把小鼠身体分为7个部位,即头部、前背部、后背部、左前肢、右前肢、左后肢和右后肢,在这7个不同的部位涂抹的颜色代表不同的编号,头部为1,前背部为2,后背部为3,左前肢为7,右前肢为14,左后肢为28,右后肢为56,把不同部位涂抹的颜色代表的数值加起来,就代表这一小鼠的实验编号。一种颜色可以给100只小鼠编号,第二种颜色可以给第101至第200只小鼠编号,第三种颜色可以给第201至第300只小鼠编号,以此类推,可以给数百小鼠进行编号(图1?3?1~图1?3?4)。

    实验病理学技术图鉴

    AtlasofExperimentalPathologyTechniques

    图1?3?1 小鼠编号法图1?3?2 用于染色编号的苦味酸溶液Figure1?3?1 NumberingmethodformiceFigure1?3?2 Picricacidsolutionusedfornumbering

    注意事项:

    (1)苦味酸溶液是首选涂染标记液,不容易退色。

    (2)染色标记时间长了染料易退掉,应随时补染。

    (3)实验动物数量较多时,小心编号过多显杂乱,易混淆。

    (二)穿耳孔法

    用动物专用耳孔器在动物耳朵的不同部位打一小孔或打成缺口来表示一定号码的方法。打孔原则左耳代表十位,右耳代表个位。这种方法可标记100只左右的动物。打孔法应注意防止孔口愈合,多使用消毒滑石粉涂抹在孔局部。

    (三)标牌法

    (1)用金属制作的标牌固定在实验动物的颈部、耳朵或脚上。

    (2)将分组编号写在卡片上,挂在动物饲养笼外。此种方法简单,易识别,数量不限。

    第一章 实验动物学基础Chapter1 AnIntroductiontoLaboratoryAnimalScience

    二、实验动物的分组

    动物编号后,通常需要根据实验要求进行分组。动物随机分组一般使用随机数字表或用计算器产生随

    机数字来进行。

    (一)随机分组的原则及方法

    随机数字表的使用方法如下:如从某群体中需要抽取10个个体作为样本,可以随机在随机数字表上定一点。假定落在16行17列的数字76上,可向上、向下或向左、向右,依次找到42、22、98、14、76、52、51、86,把包括76在内的这10个号的个体按号作为样本,作为研究总体的依据。

    使用计算器产生随机数时,每当按下2ndF(第二功能键)和RND(随机数字键)时,随机数就产生。产生的随机数值是0畅000~0畅999。所显示数的前2个小数位用作一个样本个体,如产生的随机数是0畅175,表明第17个数据作为一个样本个体,重复按键操作,直至产生所需的样本大小。

    产生随机数字后,随机分组根据所分组数来确定,现以分3组为例来介绍分组方法。例如,现有新西兰雄性家兔12只,按体重从小到大依次编为1,2,3,..12号,分为一、二、三共3个组。假设所定的点是随机数字表第40行17列的08,则从08开始,自左向右写12个随机数字:

    家兔编号: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

    随机数字:082701501529393943796910

    除以3余数:201202001101

    组别:二三一二三二三三一一三一

    调整组别:二

    以3除各随机数字,若余数为1,则该兔归一组;余数为2,归入二组;余数为0,归入三组。结果一组为4只,二组为3只,三组为5只。三组多一只调入二组,方法同上。仍采用随机方法,从10后面接着写,为61,除以5,余数为1,则将第一个三组的兔,即第2号兔调入二组,调整后各组兔的编号为:

    一组:3 9 10 12

    二组:1246

    三组:57811

    若将动物随机分为4组或更多的组,分组原则基本一致。

    (二)分组的注意事项

    动物随机分组的主要目的在于使某实验中的某主要指标平均分配到各个组中,如某减肥茶的减肥效果实验,动物的体重是此实验中主要的观察指标,因此随机分组后,各组的平均体重应趋于一致。为确保实验结果具有统计学意义,实验分组时应注意各组动物的数量不可太少,一般需进行统计学处理的实验数据,各组动物至少不可少于6只,若再考虑到实验过程中出现意外等情况,动物数量还需适当增加。实验分组时还应考虑到动物性别的影响,通常采用2种性别的动物进行试验,雌雄各半。若采用单性别动物进行试验,则应阐明其合理性。

    三、实验动物被毛的去除

    (一)剪毛法

    剪毛法是动物实验中被毛去除中最常用,也是最基本的方法。例如,外科手术时需剪毛,犬前肢内侧头静脉取血时需剪毛。剪毛时,用剪毛剪紧贴皮肤依次将毛剪去。剪毛时,不可用手提着皮毛剪,否则易剪破皮肤,而且剪毛前剪毛部位不可消毒。剪下的毛应放入一盛有清水的固定容器中,以免剪下的毛乱飞。