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| 《中药抗氧化成分的现代分离和分析技术》 |
| 作者:李丽，刘春明 主编 |
| 出版社：科学出版社 |
出版日期：2011/5/1 |
| ISBN：9787030309334 |
定价： 98.00元 |
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内容推荐
本书精选30种中药实例，详细介绍了中药苯乙醇苷类、人参皂苷类、黄酮类、生物碱类、蒽醌类和多糖类成分的现代分离、分析方法，以及抗氧化活性评价方法，着重介绍了中药抗氧化成分研究新思路、新技术和新方法。
本书可供药学研究人员参考阅读。
目录
第一章 中药抗氧化的研究
第一节 自由基和氧化伤害
第二节 中药抗氧化成分及其作用机制
第三节 中药抗氧化活性测定方法
第四节 中药抗氧化成分的提取、分离及分析技术
第二章 苯乙醇苷类化合物
第一节 概述
第二节 车前子
第三节 车前草
第四节 肉苁蓉
第五节 玄参
第三章 人参皂苷类化合物
第一节 概述
第二节 人参
第三节 西洋参
第四节 三七
第五节 人参
第四章 黄酮类化合物
第一节 概述
第二节 山楂
第三节 金莲花
第四节 银杏叶
第五节 生姜
第六节 仙人掌
第七节 马齿苋
第八节 荞麦
第五章 生物碱类化合物
第一节 概述
第二节 钩藤
第三节 吴茱萸
第四节 萝芙木
第五节 荷叶
第六节 长春花
第六章 蒽醒类化合物
第一节 概述
第二节 决明子
第三节 虎杖
第七章 多糖类化合物
第一节 概述
第二节 枸杞
第三节 刺五加
第四节 葛根
第五节 灵芝
第六节 芦荟
第七节 蛹虫草
第八节 防风
第九节 麦冬
在线试读部分章节
第一章中药抗氧化的研究
自1956年Harman在生物学基础上提出衰老自由基学说以来，人们对自由基的产生及
其对人体的危害有了越来越深刻的认识。大量研究发现，过量的自由基可以攻击生物膜不
饱和脂肪酸和蛋白质等，引发氧化损伤，使机体抵抗力下降，从而导致各种疾病发生，如癌变
和老化等病理性变化。所以，寻找能有效清除人体多余自由基的药物已引起人们的广泛关
注。目前，在食品、化妆品以及药品等许多领域广泛使用的合成抗氧化剂，如BHT、BHA、PG等虽具有较好的抗氧化性能，但长期使用具有明显的不良反应。传统中药在缓解衰老
以及衰老性疾病的防治方面有着极为丰富的实践经验。现代药理学研究表明许多中草药具
有提高抗氧化酶活性、降低氧化酶活性或直接清除氧自由基作用。
第一节自由基和氧化伤害
一、自由基及其形成
自由基(reactive oxygen species，ROS)是机体在生化反应中产生的性质活泼的具有极
强的氧化功能、可以导致机体衰老的物质。在化学结构上，自由基是指外层轨道上含有一个
或一个以上未配对电子的分子、原子、离子或基团。因而表现出顺磁特性，不成对电子具有
成对趋向，夺取或失去一个电子构成成对电子，因此自由基具有较强的化学性质，极易和其
他物质反应形成新的自由基，呈现明显的连串反应。
自由基的形成有生化、化学、物理等多方面的因素，但主要是来自人体内的生化反应，如
各种酶的催化反应或疾病(炎症、缺血、心肌梗死等)都可以产生大量自由基。此外，一些化
学物质(如腐败、霉变食物、杀虫剂、农药等)、空气污染、辐射、运动和心理压力等都会激发活
性氧和自由基的产生。人体在氧的利用过程中，会因各种内因性和外因性因素而产生各种
活性氧和自由基，这些自由基在维持机体正常代谢和疾病防治中起到积极的作用。
人体内的自由基主要包括超氧阴离子(O-
2·)、羟自由基(·OH)、氢自由基(H·)、有机
自由基(R·)、单线态氧(1O2)、过氧化氢(H2O2)、臭氧(O3)及脂类过氧化自由基(LOO·)和脂
类自由基(L·)等[1~13]。
二、氧化伤害、疾病与氧化防御系统
为维持身体的正常功能，抵御各种活性氧和自由基对器官和组织的伤害，体内有各种清
除活性氧和自由基的抗氧化物质，如抗氧化酶类、蛋白质类和抗氧化维生素等。抗氧化酶类
主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷
胱甘肽转移酶(GS-T)等，这些酶是机体内部的第一道防线，但会随着年龄的增长而下降；蛋
白质类包括铁传递蛋白、肝球蛋白、血红素结合蛋白等；抗氧化维生素有维生素C、尿酸、α-
维生素E、γ-维生素E、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素等。
当活性氧和自由基浓度超过生理限度时，多余的自由基成为有害物质，攻击脂质、蛋白
质、糖类和脱氧核糖核酸等大分子物质，发生各种氧化反应，引发各种氧化损伤，进而导致细
胞结构和功能的变化，使机体抵抗力下降，从而导致各种疾病发生，如癌症、动脉硬化、心脑
血管疾病、肝肾损伤、糖尿病、缺血再灌流障碍等多种疾病。氧化导致疾病的主要原因之一
是血液中的不饱和脂肪酸因氧化而成为过氧化物质，经小肠吸收、经淋巴和血液而流入各组
织，发生有害作用。
为加强防御系统，促进机体的健康，就有必要从体外补充各种具有抗氧化能力的物质，包括抗氧化食品和药品[2]。
第二节中药抗氧化成分及其作用机制
研究表明很多中药提取物或从中分离得到的单体化合物可抑制自由基的产生，或直接
对抗自由基对组织及细胞的损伤，或直接清除自由基，还可增强机体本身抗氧化系统的功
能，从多个环节阻断自由基的损伤作用。如来源于中药中的黄酮[14~16]、生物碱[17~22]、皂
苷[23~30]、醌类[31~34]、酚类[35]、多糖等[36~38]都具有很好的抗氧化活性。
中药抗氧化的作用机制主要表现在如下几个方面[39~41]。
1.清除自由基机体在正常细胞代谢中产生的O-
2·、·OH、H2O2、1O2等自由基可
诱发机体内不饱和脂肪酶的一系列脂质氧化连锁反应，造成生物膜结构和功能损伤，并可破
坏核酸、蛋白质等生物分子，导致人体的衰老和死亡[41]。大量研究表明很多中草药具有清
除自由基的作用。何首乌、山楂、五加皮、益母草、女贞子、甘草6种药物水提液对具有细胞
损伤作用的超氧阴离子自由基(SAFR)和羟自由基(HFR)均有清除作用，并能抑制羟自由
基(HFR)所诱发的膜脂质过氧化LPO反应[42]。羌活、川芎、柴胡、独活、蛇床子、小茴香、当
归、北沙参、白芷、藁本、白花前胡、防风及川党参13种伞形科中药95%乙醇提取液对超氧
自由基均有清除作用，其中羌活、川芎、柴胡醇提液抗O-
2·的能力最强。提取液的加入量
与抑制O-
2自由基的能力呈现明显的量效关系[43]。在连苯三酚自氧化体系中，山楂、薏仁
和三七的石油醚提取物，茵陈、柴胡、青蒿的乙醇提取物，以及茵陈、柴胡、桑皮、薏仁的水提
取物都具有较好的抑制连苯三酚自氧化、清除超氧阴离子的作用。其中山楂的石油醚提取
物和柴胡的乙醇提取物抗氧化效果最强[44]。山楂、白蒺藜及枸杞乙醇和水浸提物在卵黄脂
蛋白不饱和脂肪酸(PUFA)过氧体系中，山楂和白蒺藜具有一定的清除·OH的能力；3种
中药均具有较强的清除O-
2·的能力[45]。十大功劳具有清除O-
2·和·OH的能力，在一定
范围内随药物浓度的升高而增强[46]。Ni等采用电子顺核磁共振技术证实枸杞多糖清除羟
自由基作用非常显著[47]；Wang等也发现枸杞多糖对Fe2+-H2O2产生的羟自由基具有强烈
的清除作用，并呈明显的剂量相关性[48]。
2.增强抗氧化酶活性机体内存在着自由基防御酶和酶促系统，如超氧化物歧化酶
(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等，它们能清除自由基，保护机
体免受损伤[49]。其中SOD和GSH-Px是机体清除自由基的主要抗氧化酶，红景天、沙棘、刺五加、罗布麻、绞股蓝、蚂蚁等中药可提高机体SOD含量和活性，增强机体对自由基损害
的防御能力。Li等[50]证实枸杞子水提物在体内能显著升高急性缺氧小鼠心、肝、肺等器官
组织中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性以及总抗氧化能力，枸杞子对小鼠由急性缺氧
而造成的自由基损伤有保护作用。
3.降低脂质过氧化物(LPO)含量LPO含量增加，可引起内皮细胞生物膜系统损伤，影响细胞的功能。丙二醛(MDA)是主要的脂质过氧化产物，其含量反映了机体细胞受脂质
过氧化损伤的程度[51]。李自成等[52]报道，当归注射液能抗脂质过氧化反应，降低MDA水
平。临床应用丹参治疗后，血中LPO含量明显降低[53]。
4.能量代谢的影响线粒体是细胞能量代谢的中心，研究表明衰老时，线粒体会发生
肿胀、变性、空洞化、数量减少等一系列退行性变化，所以线粒体被认为在细胞衰老中起到重
要的作用[54，55]。琥珀酸脱氢酶(SDH)和线粒体内膜紧密结合，是受氢体中最重要的酶，不
需要辅酶，自身有黄素蛋白作为辅基，在组织反应中常用来反映三羧酸循环的情况，成为线
粒体的标志酶。葛迎春等研究表明人参皂苷能增加不同年龄的人胚肺成纤维细胞中SDH
的含量，维持了细胞能量代谢的稳定性，并且提高了衰老细胞的增殖率[56]。
5.增加胆碱系统或脑内神经递质学习和记忆是大脑高级功能之一，而记忆力的减退
是动物老化的早期症状之一。现代研究已证实神经递质及其受体的变化与脑功能的衰老有
密切关系，表现为学习与记忆力障碍。乙酰胆碱(ACh)是中枢胆碱能神经系统的重要递质。
它由乙酰转移酶(ChAT)合成，乙酰胆酯酶(AChE)分解，通过乙酰胆碱受体(ACh-R)发挥
生物学效应。ChAT和AChE共同维持ACh平衡。随着生物体年龄增长，胆碱能系统功能
逐渐衰退，表现为代谢失调、受体数目和亲和力的变化，导致中枢神经生理异常。增加大鼠
海马ChAT的活性，可提高大鼠空间学习的能力[57]。
6.基因调控学说细胞周期是细胞生命活动的基本过程，细胞在周期时相的变迁中进
入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态。细胞周期运转十分有序，沿着G1期—S期—G2
期—M期的顺序进行，G1期是启动细胞周期循环的关键。细胞衰老最显著的特征是细胞
在很长一段时间内仍维持代谢活性，但因阻滞于G1期，失去了对有丝分裂原的反应和合成
DNA的能力，不能进入S期。在衰老的成纤维细胞中，其细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期
蛋白依赖激酶(CDK)、CDK抑制因子发生量与活性的变化。cyclinE是一种周期性表达的
细胞周期蛋白，在G1期与S期交界处，与CDK一起发挥其蛋白激酶的活性，是细胞从G1
期进入S期的关键性周期蛋白。
赵海花等探讨了人参皂苷对老龄大鼠NBM神经元TrkBmRNA表达的影响[58]，结果
显示老龄组大鼠NBM神经元TrkBmRNA表达显著低于青年组，而给药组较老龄组大鼠
表达增多。
7.保护DNA自由基可造成DNA单、双链断裂以及碱基损伤，使细胞发生突变。
DNA分子的损伤又使主要的酶表达缺乏，引起细胞死亡[51]。吕明庄等[59]报道，芦荟可以有
效减轻臭氧衰老模型中小鼠肝、脾细胞DNA的损伤程度。
第三节中药抗氧化活性测定方法
生物体在进行氧化还原反应的过程中伴有活性氧的产生，不同的中药对不同的氧自由
基清除效果各异，机制也各不相同，所以应根据不同的中药以及氧自由基建立其相应的检测
方法来评价中药的抗氧自由基活性。
1.铁离子还原法铁离子还原法(ferric reducing antioxidant power，FRAP)是一种测
定物质总的抗氧化能力的方法，具有快速、易于操作、重复性好等优点。该方法已广泛用于
抗氧化活性物质的分析测定。其原理是基于氧化还原反应的比色法，在低pH的溶液中，Fe3+-TPTZ(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成Fe2+-TPTZ，使反应液变成深蓝色，在
593nm处有最大光吸收，这样通过测量样品吸光度的变化来测量其抗氧化能力[60]。
实验中将Acetate缓冲液(300mmol/L，pH3.6)，10mmol/LTPTZ(溶解在40ml
HCl)和20mmol/LFeCl3以10∶1∶1(V∶V∶V)比例混合，配制成FRAP试剂。需要注
意的是FRAP试剂一定要新鲜配制。取10μl的标准品或样品溶液，迅速加入300μlFRAP
试剂，混匀。测试温度为37℃，仪器波长为593nm，测量时间为4min。样品FRAP测量值
通过1000μmol/L的L-ascorbicacid来计算。计算公式如下[61]：
FRAP值(μmol/L)＝(0~4minΔA593nm样品)/(0~4minΔA593nm标准品)×500×2(μmol/L)
2.β-胡萝卜素-亚油酸法(β-carotenebleachingtest，β-CLAMS)β-胡萝卜素是一种多
烯色素，容易被氧化而褪去黄色，在反应介质溶液中，由亚油酸(linoleicacid)氧化产生的过
氧化物能使β-胡萝卜素褪色，随着时间的延长吸光度越来越小。加入抗氧化剂后，β-胡萝卜
素降解速率减少，其降解的程度与体系中抗氧化活性物质的强弱有关，抗氧化能力越强，降
解越慢，这样在波长491nm处通过测量所有样品的吸收度，根据吸光度曲线便可分析抗氧
化剂的抗氧化能力[62]。
将25μl亚油酸和200mg吐温40溶解在2ml氯仿溶液中，加入0.5mgβ-胡萝卜素，利
用旋转蒸发仪在减压条件下挥干氯仿(<40℃)，然后加入100ml氧化水(HPLCgrade)，制
得测试混合液(新鲜配制)。35μl水(空白液)，标准品(2，6-二叔丁基对甲酚，BHT)或样品
溶液中迅速加入250μl测试混合液。测试温度为45℃，波长为491nm，每15min测一次，一
共运行180min[63]。
3.PCL方法实验采用Photochem棆(Berlin，Germany)超快速抗氧化剂和自由基全自
动分析仪。该设备可以测定水溶性或脂溶性物质的抗氧化能力，并用相当于维生素C(水溶
性物质)或Trolox(脂溶性物质)当量值表示测定结果。该法具有很高的灵敏度，能测出
10-9mol/L级浓度的非酶抗氧化物，测定时间短。其原理是由光化学法生成自由基，并利用
化学发光法检测自由基。在实验中使用具有光化学激发作用的光敏剂(photosensitizer，发
光氨)激发反应分子，使之在紫外灯的作用下以比正常条件下快1000倍的速度发生氧化反
应，迅速产生自由基。发光氨(luminol)是一种光致化学发光物质，通过测量反应所生成的
光强度来测量自由基的瞬间含量(光强与自由基含量成正比)[63]。
实验中需要稀释样品溶液，以使滞后时间距(lag-phase)落在标准曲线的线性范围内。
Photochem棆产生标准曲线和测试样品的抗氧化活性都是自动进行的，样品的抗氧化活性是
用相当于L-ascorbicacid或Trolox的纳摩尔数来计算。
4.DPPH·分析方法二苯基苦味肼基自由基[DPPH·]是一种稳定的以氮为中心的
自由基，在515nm波长处有最大吸收。[DPPH·]甲醇溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线
性关系。在[DPPH·]甲醇溶液中加入抗氧化剂后，抗氧化剂可以与[DPPH·]自由基结
合或发生替代，使[DPPH·]自由基数量减少，溶液颜色变浅，表现为其在515nm波长处的
吸光度不断减小，直至达到稳定。
实验中配置一定浓度的[DPPH·]溶液，以浓度为横坐标、吸光度值为纵坐标制作[DPPH·]
·4·中药抗氧化成分的现代分离和分析技术
标准曲线方程。之后配制不同浓度的样品和标准品溶液，分别取0.1ml样品或标准品溶
液，加入3.9ml质量浓度为2.5mg/100ml[DPPH·]标准液(现用现配)。乙醇溶液为空白
对照，将混合溶液摇匀，用比色皿在515nm波长处测定其在不同时间的吸光度值，根据标准
曲线方程换算成[DPPH·]的质量浓度，计算出[DPPH·]残留率。根据[DPPH·]残留
率和相应的样品添加量，绘制样品清除[DPPH·]自由基的曲线。根据[DPPH·]的质量
浓度与吸光度的关系曲线，将添加自由基清除剂后测得的吸光度换算为[DPPH·]的质量
浓度，计算出添加自由基清除剂后的[DPPH·]残留率，计算公式如下：
[DPPH·]REM＝[DPPH·]T/[DPPH·]T＝0×100%
其中[DPPH·]T为自由基清除过程中某一时刻DPPH·的质量浓度，[DPPH·]T＝0为
DPPH·的原始质量浓度。
根据抗氧化剂添加量与[DPPH·]残留率，制作二者的关系曲线，通过线性回归分析可
以得到回归方程，根据回归方程式可以计算出[DPPH·]残留率为50%时的抗氧化剂量即
半抑制量(EC50)和自由基清除能力AE(antiradical efficiency)，AE＝1/EC50
[64]。
5.清除羟自由基(·OH)的作用按Fenton反应原理，Fenton反应体系邻二氮菲-Fe2+氧
化法进行测定，芬顿反应产生·OH，向体系中加入的是·OH产生的抑制剂，则·OH减少，呈色
反应的吸光度也相应地减少。
取1.5ml0.1mol/L邻二氮菲分别放入试管中，加入4.5ml0.1mol/LpH＝7.4磷酸盐
缓冲液，混匀后加入1ml0.001mol/LFeSO4溶液，立即混匀，分别加入1ml一定浓度的试
样，然后加入1ml0.1%H2O2启动反应，于37℃保温60min，510nm处测定吸光度值。同时
设置损伤管(加入1ml蒸馏水代替样品液，1ml0.1%H2O2启动反应)和未损伤管(加入2ml
蒸馏水代替样品液和H2O2)以相同浓度的维生素C作对比实验，其中损伤管和未损伤管以
磷酸盐缓冲溶液调零，加药管以同浓度不加H2O2的加药管调零。按下式计算羟基自由基
的清除率：
OH·的清除率(%)＝(A加药-A损伤)/(A未损-A损伤)×100%[65]
6.超氧阴离子自由基(O-
2·)清除能力测定利用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶反应系统产
生超氧阴离子自由基，当加入电子传递物质及Gress显色剂后，溶液呈现紫红色，在550nm
下测定其吸光度。以0.15mg/ml维生素C为样品对照，以蒸馏水做空白对照，具体操作过
程按照试剂盒说明进行。按照下面公式计算其清除率。清除率(%)＝(Ab-AS)/Ab×100，式中：Ab为空白对照管的吸光度值，AS为样品测定管的吸光度值[66]。
7.邻苯三酚法按邻苯三酚自氧化反应方法，取6支比色管分别移取50mmol/L
(pH8.2)的Tris-HCl缓冲溶液4.5ml，在2~6号比色管中分别加0.5ml浓度为0.07、0.14、0.28、0.42、0.56mg/ml的样品溶液，置于25℃水浴中预热20min，再向这5支试管中
加入25℃预热的3mmol/L邻苯三酚0.3ml立即混匀后，在30s内用蒸馏水补至25.0ml，最
后在25℃水浴中准确反应4min，立即滴加0.5ml浓度为8mol/LHCl终止反应。在325nm
处测定吸光度。以等体积pH2的Tris-HCl缓冲液作为空白。吸光度越低，清除超氧阴离
子自由基效果越好。超氧阴离子的清除率＝(A0-A1)/A0×100%式中，A0为空白对照组
吸光值；A1为某浓度黄酮溶液的吸光值。
邻苯三酚-鲁米诺-碳酸缓冲液体系产生的超氧阴离子(O-
2·)的清除能力，采用化学发
光法，在发光杯中加入10μl样品溶液(以10μlDMSO作空白对照)和20μl邻苯三酚溶液，加入鲁米诺-碳酸缓冲液混合溶液启动反应，记录发光强度(CL)，计算各供试品对O-
2·的
清除率，自由基清除率(%)＝(CL空白-CL样品)/CL空白×100%，以高浓度逐渐稀释的方法检
测不同浓度样品对自由基的清除率，采用BPCLAppl7.2数据处理工作站计算各化合物
IC50，以IC50作为活性评价指标[67，68]。
8.脂质过氧化值测定法分别精密称取样品5、15、25、35mg，用5ml乙醇溶解，加入到
装有15g熔化猪板油的碘量瓶中，不时搅拌成匀相，使抗氧化剂充分扩散进油样中。置于
70℃恒温箱中强化保存，每隔12h搅拌1次，并交换在培养箱中的位置，确保环境条件相同。
5d后测定其过氧化值(POV)，以不加抗氧化剂的油样为空白对照(CK)。采用国标方法
(GB/T5538-1995)测定POV值，POV的计算公式如下：POV＝C×(V1-V2)×0.1269×
100。式中，POV为样品过氧化值(mmol/100g)；C为硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度
(mol/L)；V1为样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积(ml)；V2为空白试验消耗硫代硫酸钠
标准溶液的体积(ml)；m为样品质量(g)；0.1269为与1mlNa2S2O3标准滴定溶液相当的碘
的质量(g)。取2g混匀的样品，置于碘量瓶。加入10ml三氯甲烷及15ml冰乙酸和1ml碘
化钾饱和溶液迅速盖好瓶塞，混匀1min，避光静置5min。然后加入50ml蒸馏水，充分混合
均匀，立即用2mmol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至浅黄色时，加入1ml淀粉指示剂，继续
滴定至蓝色消失为止，记下体积V1，计算POV值[69]。
9.清除ABTS+自由基法用ABTS评价一些化合物的抗氧化能力方法，根据这些待
测化合物清除预先生成的ABTS+自由基的能力来评价其抗氧化活性。同时测定多个样
品，可以使用酶标仪来评价物质的抗氧化活性[70]。将5ml的7mmol/LABTS和88μl的
140mmol/L高硫酸钾混合，在室温、避光的条件下静置过夜，形成ABTS+自由基储备液。
该储备液在室温、避光的条件下稳定。使用前用无水乙醇稀释成工作液，要求当在200μl工
作液中加入50μl无水乙醇时其在30℃、734nm波长下的吸光度为0.51±0.02。在96孔酶
标板的每孔中加入50μl的标准或样品，再加入200μl的ABTS+工作液，以250μl的无水乙
醇为空白，混合10s，30℃静置6min，在734nm波长下读取吸光度。以Trolox作为参照物，使用的标准系列为20、40、60、80、100和120μmol/L。将待测物质清除自由基的能力与
Trolox清除自由基的能力相对比，确定其相对抗氧化活性，单位为TEAC(troloxequivalent
antioxidantcapacity，Trolox抗氧化当量)，即1μmol/L待测物质的自由基清除能力相当于
Trolox的自由基清除能力的微摩尔数。在实验中，标准曲线和TEAC值可由随机软件直接
给出，也可以通过计算得出。为反映提取抗氧化活性物质的效率，其抗氧化活性表示为从
1g样品中提取出的抗氧化物质的自由基清除能力相当于Trolox的自由基清除能力的微摩
尔数。
10.清除H2O2法取4.5ml0.1mol/LpH＝7.4磷酸盐缓冲液，加入2ml0.05%
H2O2后加入1ml一定浓度的试样，立即混匀，在340nm处测定吸光度值A1。实验中以不
加试样的H2O2吸光度为A0以不加H2O2的试样溶液的吸光度为A2，按如下公式计算其
平均值：H2O2的清除率(%)＝[A0-(A1/A2)]A0×100[71]。
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